Análisis antigénico y molecular de los factores de colonización de escherichia coli enterotoxigénicos (ETEC) porcinosvacunas con antígenos de colonización purificados (ISCOM y microesferas)

Resumo

El propósito final de este estudio fue la valoración de la protección presente en el ganado porcino contra la diarrea neonatal causada por Escherichia coli, Enterotoxigenicos (ETEC) y el desarrollo de nuevas formulaciones de vacunas. Hemos caracterizado por técnicas electroforéticas e inmunoblotting los antígenos fimbriales más importantes en nuestra región (K88,K99,P987,F41). Los pesos moleculares para las subunidades principales oscilaron entre los 17,0 KDa para K99 y 30,9 KDa para F41. La técnica de ELISA, en sus variantes de ELISA indirecto y sandwich fue utilizada para la cuantificación de antígenos fimbriales en preparados vacunales comerciales y para la determinación de IgG e IgA en muestras de suero y calostro de cerdas. Las cerdas inmunizadas con vacunas comerciales presentaron niveles de IgG e IgA específicos contra los antígenos fimbriales en contraposición con los observados por los animales no vacunados. El ensayo de ELISA fue también utilizado para el estudio de la expresión "in vitro" de los antígenos fimbriales. Construimos, caracterizamos y valoramos tres formulaciones vacunales en base a antígenos fimbriales purificados: ISCOM (inmunostimulating complex), combinaciones de antígenos fimbriales y matrices ISCOM (iscomunem40) y microesferas de dl-o poli (DL láctico-co-glucólico) (DL-PLGA). Los animales inmunizados con una única dosis de microesferas de PLG con antigeno K88ac incorporado, en función de la concentración de antígeno utilizada presentaron unos títulos prolongados de IgG especifica similares a los obtenidos en los animales inmunizados con dos dosis de ISCOM o bien la combinación de Iscomune-M40 y antígeno fimbrial K88ac.