Vitreorretinopatía proliferante (V.R.P.)nuevos métodos para estudiar su patogenia: nuevas posibilidades terapéuticas

Abstract

Introducción. Los objetivos de este trabajo han sido determinar la importancia que la expresión de ciertos genes relacionados con la proliferación celular tiene en la producción de la Vitreorretinopatía Proliferante (V.R.P.). Para ello, se han tomado como modelo los cultivos de células de epitelio pigmentario de la retina humana (E.P.R.) (como principal estirpe celular implicada en la génesis de la V.R.P.). A partir de estos cultivos, se ha determinado la implicación de las vías mitogénicas controladas por los proto-oncogenes cmyc, ras y rho. Material y Métodos Los cultivos celulares de células del E.P.R. fueron establecidos a partir de donantes al Banco de Ojos del Complejo Hospitalario Universitario de Santiago. La proliferación y viabilidad celulares se determinaron mediante un ELISA para valorar la incorporación de 5-bromo-2-deoxiuridina al ADN celular y el test de transformación de MTT, respectivamente. La expresión génica se valoró por Northern blot y por inmunofluorescencia. Los cambios morfológicos en el fenotipo celular se pusieron de manifiesto mediante microscopía de contraste de fases y por tinción del citoesqueleto de actina mediante faloidina-TRITC. La presencia de apoptosis se identificó mediante determinación de fragmentación de ADN en geles de agarosa y mediante el procedimiento TUNEL. Resultados Se ha visto que las células E.P.R. humanas en cultivo expresan el proto-oncogén c-myc (Northern blot e inmunofluorescencia). Además, se ha demostrado que la adición a los medios de cultivo de un oligonucleótido antisense dirigido contra los cinco primeros codones del ARN mensajero de c-myc tiene un efecto dosis y secuencia dependientes sobre la proliferación de estas células, con ausencia de toxicidad a las dosis probadas. La acción del oligonucleótido demostró ser altamente específica, dependiente del mecanismo antisense llevado a cabo por la molécula. Por otra parte, se ha