Caracterización molecular, inmunológica y fisiológica de la proteína de unión del hierro, FbpA, de " Neisseria meningitidis "

Resumo

En esta Tesis Doctoral se ha estudiado desde diferentes puntos de vista la proteína de Neisseria meningitidis encargada del transporte del hierro al interior de la bacteria y que se denomina FbpA. Esta proteína ha sido identificada en todas las cepas meningocócicas, así como en algunas especies comensales del género Neisseria, y se ha comprobado su carácter de proteína regulada por el hierro, es decir, la FbpA se sintetiza en mayor cantidad cuando la bacteria crece en un ambiente con restricción del hierro. Se ha diseñado un protocolo de purificación de la proteína FbpA basado en la cromatografía de afinidad a hierro que permite obtener la proteína en condiciones nativas. La determinación del punto isoeléctrico ha revelado un valor altamente básico, situado entre 9,2 y 9,5 y coincidente con el descrito para la FbpA de Neisseria gonorrhoeae. La disponibilidad de la proteína purificada en estado nativo ha permitido estudiar la respuesta inmune frente a la FbpA. Esta proteína es inmunogénica en ratones y los anticuerpos dirigidos contra ella muestran una total reactividad cruzada cuando se enfrentaron con la proteína FbpA de diferentes cepas meningocócicas. Sin embargo, estos anticuerpos no poseen actividad bactericida significativa ni siquiera frente a la cepa homóloga y no son capaces de bloquear la asimilación del hierro a partir de diferentes fuentes del metal. En ningún caso se han detectado anticuerpos anti-FbpA en sueros humanos procedentes de pacientes que habían sido hospitalizados con infección meningocócica de lo que se deduce la falta de inmunogenicidad in vivo de la proteína estudiada durante la infección en el organismo humano. En este trabajo se ha demostrado la exposición de la proteína FbpA en la superficie del meningococo. La demostración se ha llevado a cabo por métodos diversos como inmuno-ensayos en fase sólida, en fase líquida y, sobre todo, utilizando la inmunomicrosco