Superoxido dismutasa en peroxisomas vegetales especializadoslocalizacion intraorganular y estudio de la producción de radicales libres de oxígeno

Resumo

En peroxisomas aislados se ha demostrado por primera vez la presencia de la metaloenzima superoxido dismutasa (sod; ec 1. 15. 1. 1). Para el estudio de esta localizacion celular se utilizaron dos clases de peroxisomas con distinto grado de especializacion: glioxisomas y peroxisomas de hojas. En glioxisomas purificados de cotiledones de citrullus vulgaris schrad. Se identifico la presencia de dos isoenzimas de superoxido dismutasa una cu zn-sod y una mn-sod que representan el 80% y el 20% de la actividad sod total presente en estos organulos respectivamente. Mediante ensayos de solubilizacion y latencia de actividad sod en glioxisomas intactos se pudo comprobar que la isoenzima cu zn-sod se encuentra localizada en la fraccion soluble de estos organulos (matriz) mientras que la mn-sod minoritaria parece encontrarse ligada a la parte externa de la membrana glioxisomal. Por el contrario en peroxisomas intactos purificados de hojas de pisum sativum l. Solamente esta presente la isoenzima mn-sod ubicada en la matriz de estos organulos oxidativos. Utilizando metodos quimicos y de resonancia de spin electronico (rse) en la modalidad de atrapamiento de spin se investigo la produccion de radicales libres de oxigeno (o sub 2 e oh) en fracciones suborganulares de glioxisomas. Las purinas xantina e hipoxantina inducian la produccion de radicales o sub 2 en matrices de glioxisomas y esta generacion era inhibida por el alopurinol un represor tipico de la xantina oxidasa. En membranas de glioxisomas el nadh estimula la produccion de radicales libres superoxido con tasas de generacion de radicales ligeramente superiores a las observadas en matrices. Esta generacion de radicales superoxido por purinas se debe a la xantina oxidasa (ec 1. 1. 3. 22) una fe mo flavo-enzima eficaz productora de o sub 2 cuya presencia en glioxisomas fue localizada en la matriz de estos organulos. Estos resultados constituyen la primera evidencia de la