Estudio de la función de PKC [alfa] y PKC [beta] en la activación de los linfocitos T

Abstract

La activación de los linfocitos T a través del TCR está asociada, entre otros acontecimientos, con la hidrólisis de los fosfolípidos de inositol y la producción resultante de polifosfatos de inositol y diacilglicerol, los cuales regulan los niveles de calcio intracelular y la activación de PKC. El término PKC se refiere a una familia de serín-treonín proteín quinasas compuesta de al menos 11 isoformas. Estos isotipos son todos activados por fosfolípidos y, con notables excepciones, por diacilglicerol. Sin embargo estas difieren en gran medida en su sensibilidad al Ca2+. Aunque está bien establecido que las PKCs desempeñan un importante papel en la activación de estas células, se conoce muy poco acerca de las funciones de las distintas isoformas. Para explorar este aspecto, transfectamos la línea celular Jurkat con plásmidos que expresan fragmentos del ARNm de PKCalfa o PKCbeta en la orientación antisentido y determinamos los efectos de esta transfección sobre el proceso de activación. Los resultados preliminares mostraban que las poblaciones as-PKCalfa-pREP3 y que las poblaciones as-PKCbeta-pREP3 respondían de modo opuesto a la inducción de la expresión del IL-2R, lo que sugería que estas dos isoformas desempeñaban diferentes funciones en la activación de las células T. Sólo fuimos capaces, sin embargo, de demostrar la reducción de los niveles de PKCalfa en las poblaciones recombinantes as-PKCalfa-pREP3, de las que aislamos dos clones con una reducción significativa de los niveles del enzima. Los niveles de las isoformas PKC psi y lamda estaban también reducidos en estos dos clones, mientras que los niveles del resto de las isoformas permanecían inalterados. Por otra parte, los niveles del ARNm de PKCalfa en las líneas celulares mutantes para esta isoforma también eran deficitarios, lo que sugiere que la inhibición de la expresión de esta enzima podría producirse a través de un mecanismo dep