Identificación y estudio de las proteínas que interactúan con la protimosina alfa en células animales en proliferación

Resumo

La protimosina alfa (ProTalfa) es un polipéptido cuya función nuclear se relaciona con la proliferación celular, aunque no son conocidos los mecanismos mediante los cuales su actividad se ejerce. Con la intención de esclarecer su función, llevamos a cabo la caracterización de componentes celulares que en linfocitos de bazo de ratón en proliferación muestran afinidad por la ProTalfa enlazada a Sepharosa. En esta investigación encontramos que la mayor parte de los blancos específicos de la ProTalfa en estas células son citosólicos y la actividad proliferativa de las células incrementa la concentración de estos componentes pero no su número, de 11 proteínas principales. Similares componentes con afinidad por ProTalfa, en movilidad electroforética, se encontraron en linfocitos tumorales (células NC-37), si bien es mayor la presencia, entre éstos, de proteínas nucleares. Entre las proteínas presentes en los subfraccionados de linfocitos de bazo de ratón en proliferación, que presentan afinidad por la ProTalfa, hemos caracterizado las histonas H3, H2B, H2A y H4, confirmando los datos previos de nuestro laboratorio que han demostrado la interacción de estas proteínas con la ProTalfa. Para profundizar en esta afinidad hemos investigado la interacción de la ProTalfa con los nucleosomas purificados de linfocitos de bazo de ratón, mediante experimentos de inducción de enlaces cruzados con el agente químico DSP demostrando que la ProTalfa se une a los nucleosomas por medio de sus cuatro histonas, principalmente de las H3, H2A y H2B, siendo más destacada esta unión a relaciones molares nucleosomas:ProTalfa 0,6:1. Cuando las histonas se encuentran libres del nucleosoma, se unen a la ProTalfa principalmente las histonas H2A y H2B, siendo la relación molar óptima la 0,1:1 (mezcla equimolecular de histonas:ProTalfa). En ausencia del enlazador DSP la electroforesis no desnaturalizante y la filtración molecular sep