Estudio de la actividad de endonucleasas de restricción sobre el material genético de cultivos celulares de mamíferos
- GONZALEZ TIZON ANA M.
- Josefina Méndez Director
Universidade de defensa: Universidade de Santiago de Compostela
Ano de defensa: 1989
- Gonzalo Álvarez Jurado Presidente
- Vicente Goyanes Villaescusa Secretario/a
- Ramón Giráldez Ceballos-Escalera Vogal
- María Esperanza Cerdán Vogal
Tipo: Tese
Resumo
La accion de Hind III, Hae III, Eco ri, Hpa II, Msp I, Bst ni y Hinfi indujo patrones de bandas G sobre los cromosomas metafásicos de la linea celular don de hamster chino, mientras que Alu I indujo un patron de bandas C. No se detectaron polimorfismos cromosómicos tras el tratamiento por dichas endonucleasas. El estudio detallado bajo microscopia óptica permitió comprobar que la respuesta de los cromosomas a los tratamientos enzimáticos fue diferente segun la duración del tiempo de incubación, lo cual permitió establecer cuatro estadios de digestión cromosómica. Asi mismo se comprobo que el grado de condensación cromosómica influye en la respuesta de los cromosomas a los diferentes tratamientos. El estudio ultraestructural de cromosomas digeridos en suspensión permitió comprobar la inducción de los patrones de bandas observados previamente al microscopio óptico y la aparente actividad endonucleasica a nivel de los centrómeros de los cromosomas 1, 2 y 9 de esta línea celular. Por otra parte el análisis mediante microdensitometría y técnicas de electroforesis reveló la extracción de ADNcromosómico que tiene lugar durante el tratamiento enzimático. Ambas técnicas permitieron comprobar que las endonucleasas Alu I y Hae III (con secuencias de reconocimiento de 4 p.B.) producen degradaciones superiores a las ocasionadas por la endonucleasas con secuencias de reconocimiento de 6 p.B. Tambien se comprobó la inducción de patrones de bandas G por los correspondientes tampones de incubación.