Estudios sobre el complejo monomérico, con actividad mitogénica, formado por el factor de crecimiento para fibroblastos ácido fgf1 y un hexasacárido de diseño, análogo de heparina. Una visión estructural y dinámica utilizando rmn

Resumo

Las proteinas desempeñan una gran variedad de funciones esenciales para la célula. Asimismo, es conocido que las protelnas se unen a carbohidratos para desarrollar funciones tan importantes como la adhesión celular, el control del crecimiento celular y la angiogénesis. Por lo tanto, el estudio de la estructura y dinámica de las proteinás en estado libre y en los complejos protelna-carbohidrato es imprescindible para entender procesos de gran relevancia biológica. En esta Tesis Doctoral, y dentro de este contexto, se van a estudiar las bases estructurales de la activación del factor de crecimiento para fibroblastos ácido (FGF1) de 139 residuos. los FGFs son miembros de una familia de proteínas cuya función biológica está relacionada con los procesos de crecimiento y diferenciación celular, cubriendo la práctica totalidad de los tejidos de origen mesodérmico y neuroectodérmico en vertebrados. Todo ello implica la participación de estas proteínas en el desarrollo tumaral y en un importante número de patologías de origen genético. Es conocido, que en el mecanismo de activación de los FGFs intervienen tanto la heparina, como los FGFRs (receptores de FGFs situados en las membranas celulares). Sin embargo, existe cierta controversia acerca de la interacción que se produce entre ellos para dar lugar al complejo bíológicamente activo. Conviene, por esta razón, estudiar las interacciones que tienen lugar entre cada uno de los componentes del complejo. Para ello se va a utilizar un hexasacárido que presenta en disolución el mismo plegamiento que la heparina y que tiene cargas en una sola de las caras de la estructura helicoidal. la proteína se expresó en abundancia natural de 13C y 15N, marcada con 15N (empleando 15NH4CI) y doblemente marcada con 13Cy 15N (empleando 13C-U-glucosa). El rendimiento final fue de 112 mg/l de cultivo. Una vez obtenida la protelna se procedió a formar el complejo con el hexasacárid